線性PEI MAX 40K轉(zhuǎn)染說(shuō)明書

化學(xué)名：線性聚乙烯亞胺，線性PEI，聚乙烯亞胺，線性，MW 40000，轉(zhuǎn)染級(jí)  

線性聚乙烯亞胺 分子量40000

訂貨號(hào)＃： 78PEI40000   規(guī)格：100mg 500mg  5g

品牌：BIOHUB                     CAS＃： 49553-93-7

分子量： 40,000（~22,000自由基）

溶于：水           不溶于：常用有機(jī)溶劑（乙醇，丙酮，四氫呋口南）  

外觀：白色至灰白色自由流動(dòng)的固體  

處理：手套和通風(fēng)櫥             儲(chǔ)存：在室溫下避光干燥儲(chǔ)存

PEI MAX 40K（在游離堿中也稱為PEI 22K）是一種功能強(qiáng)大，值得信賴且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。在HEK293和CHO大多數(shù)表達(dá)系統(tǒng)中，PEI MAX都能提供穩(wěn)定的高表達(dá)（96孔板至100L生物反應(yīng)器）。現(xiàn)在每年有更多的研究人員和公司來(lái)使用PEI MAX進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，因?yàn)橄鄬?duì)于大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑而言 PEI MAX既能等到穩(wěn)定的高表達(dá)又能使轉(zhuǎn)染成本降低少40%。

PEI MAX 比更PEI 25K易于使用，并且比PEI 25K有更高的轉(zhuǎn)染效率，通常PEI 25K轉(zhuǎn)染過(guò)程通常需要幾個(gè)小時(shí)才能完成準(zhǔn)備，而PEI MAX 40K可在兩小時(shí)內(nèi)完成整個(gè)轉(zhuǎn)染過(guò)程。另外，PEI 25K含有4-11％的殘留丙酰基，這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合，而PEI MAX 40K的丙酰基*脫落，意味著PEI MAX每批產(chǎn)品的性能更加穩(wěn)定。

PEI 25K（KE1075）和PEI MAX 40K（KE1098）的比較

配置：1：稱取100mg PEI MAX，加新鮮的細(xì)胞級(jí)別的水90ml，攪拌溶解。

2：調(diào)整pH值至7.0 ，定容至100ml，用0.22um的濾器過(guò)濾，分裝后儲(chǔ)存于4℃，保質(zhì)期可以達(dá)到12個(gè)月。

轉(zhuǎn)染操作流程：

◆ 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 1.5 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后 5 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間。

◆ 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 1.5 h 后，添加?體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后5h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。

5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過(guò)夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 ?

特別提醒

1. 對(duì)于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著 提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為 70~80%。

2. 對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是 DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

4. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI MAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 體積線性PEI MAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

   5.本手冊(cè)只是一個(gè)基本操作手冊(cè)，具體轉(zhuǎn)染過(guò)程中需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化方向?yàn)榛旌蠒r(shí)間，轉(zhuǎn)染時(shí)間，DNA混合比列
   6.PEI MAX(MW 40,000) 為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的檢測(cè),保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過(guò)程中有很多實(shí)驗(yàn)室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dna RNA純度,細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度，分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴，針對(duì)極個(gè)別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復(fù)，對(duì)于產(chǎn)品產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率不高，轉(zhuǎn)染批間有差異，轉(zhuǎn)染不了等問題，不作為評(píng)價(jià)我們售后工作的依據(jù)。如果我們提供的PEI手冊(cè)都無(wú)法解答您的問題,建議您可以多看文獻(xiàn),多調(diào)整一下轉(zhuǎn)染條件,找出適合自己細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法。如果無(wú)暇摸索條件,您也可以直接購(gòu)買我們配置好細(xì)胞轉(zhuǎn)染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解

轉(zhuǎn)染試劑和DNA配比數(shù)據(jù)

轉(zhuǎn)染效率